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【技术】【Orbi第2问】准确度为什么没有期待的高? |
Orbi采用FT变换但属于非超低温磁体环境,能把分辨率做到50万甚至极新号称100万(本人未见), 硬件系统绝对是有高超的技术和技巧的。常规运行样本时, 分辨率10万以上是较常见的,而Q-TOF仪器极好一般就是3~4万【FT-ICR, 常规LC-MS的分辨率30万以上是较差的】。 分辨率与准确度很有关系,但不能划等号。分辨率太低的话, 准确很难很好(主要是可能有干扰峰)。但是当分辨率较高时, 是不是分辨率越高准确也越高?目前,还难以有理论依据。 如果质谱峰不存在干扰,准确度主要与系统稳定性(硬件和环境)和 校正体系相关(包括实验和软件),当然,分子大小与准确度是密切相关的。 在我的实践中,比较过Q-TOF(布鲁克公司)与Orbitrap的准确度, 在Q-TOF的分辨率足够测定适当分子量范围蛋白时,比如分子量30kDa左右, 实测值与理论值比较之后,很惊奇的发现,Orbitrap的准确度居然比MTQ略微差一点。 鉴于Orbitrap强大的分辨率,我们没敢以少数几次结果为判别依据, 而是观察了2年的数据,证实了Orbitrap的准确度没有期待的那么高。 猜测一下可能的原因,考虑到Orbi体系做酶切肽段的质量准确度非常稳定的高, 因此,我认为首要的原因应该是Thermo去卷积软件(ProteinDeconvolution) 或许导致了准确度偏低。曾研究过此软件的原理,一直未得到官方的交流机会, 目前觉得它的算法有问题。 以个人的判断,Waters和布鲁克的蛋白去卷积算法较为专业,AB和Thermo的有待改进。 更多精彩文章,请关注公众号 【药网堂】 All rights reserved , visit the micromessage 药网堂 for more @ tofms_org@126.com ![]() 【wkh, 2017-08-11 15:53:39】 【责任人 wkh】 [已阅读 819 次] |
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