二硫键是蛋白质药物的重要特征，许多蛋白药物的功能受二硫键影响，所以，某些表达体系不合适制造二硫键丰富的蛋白质药物，因为有太多二硫键异构体。与二硫键密切相关的是自由巯基，它的天然发生机制还不是特别确切，多数可能是二硫键的附属结果，少数可能是功能需要。

含有一个自由巯基的蛋白比较多，比如HSA，就有1个。很少一部分蛋白含有2个自由巯基，比如XXGF、XXNB等，它的自由巯基是因为4个Cys形成二硫键时不完全所致【空间位阻】，此时，往往涉及到多种自由巯基位点分布的异构体，对产品质量控制有一定影响，也存在一定的安全风险。

含有3个或更多自由巯基的蛋白药物是非常罕见的，人工表达蛋白时如果出现这种情况，一定是表达体系或工艺出了问题，应该改进。

如果一个蛋白有16个Cys而没有一对二硫键，这16个自由巯基在药物中一定是巨大的安全风险因子。它们一定会与体内其它含自由巯基的蛋白或自身之间发生交联反应，产生交联产物【比如偶联到HSA上，导致HSA失去应有的功能】，可能产生强大的免疫原性。如果产生复合物沉淀，那所带来的不良反应可能是灾难性的。

在重组药物中发生过多自由巯基蛋药物时，有一种可能是工艺中被迫加入了一定量还原剂。我曾经遇到几起案例。都是大肠表达时，异构体非常复杂，企业索性主动加入DTT保持蛋白无二硫键状态，后来我劝他们放弃了这种做法，改成优化复性工艺，降低异构化程度。有一家我则根据他们现有体系建议改成了双链结构，经过详细比对研究，极终采纳了我的建议并成功报批临床申请【一类新药】。

CHO体系中，16个Cys都没有形成二硫键的话，是无法理解的结果。如果真实存在，应该是主动加入了还原剂，比如谷胱甘肽，但这样极有可能发生谷胱甘肽封闭Cys的可能，推测会较大程度改变蛋白药物性能，还可能带来严重安全风险。

总之，重组蛋白药物不应该留下较多的自由巯基。建议仔细研究表达工艺进行二硫键和自由巯基状态改善。



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【wkh, 2020-06-21 00:33:50】 【 111.198.250.67】 【责任人 wkh】 [已阅读 1014 次]