脱水是蛋白和多肽常见杂质来源之一,与序列和工艺均有关系,当其比例超过一定值后,需要进行详细结构确证研究。
ms/ms碎片匹配不仅是鉴定蛋白质的关键,更是修饰鉴定不可缺少的环节。在我们的常规工作中,主要修饰和特殊修饰都必须给出ms/ms图且匹配要良好以上。
脱水较为特殊,一则缺少特异性,二则ms/ms碎片就有脱水碎片,它很可能与样品脱水混淆。因此,串联质谱鉴定脱水时,需仔细区分碎片脱水和样品脱水。
更重要的是,当C末端氨基酸侧链连接了可参与脱水的氨基酸或有机物时,脱水情况就复杂多了。此时,必须严格区分【肽段C末端COOH】与【侧链的COOH】,比如,肽段C末端氨基酸为K,而它的侧链被E修饰,这样ms/ms的序列碎片离子肯定无法用来分析脱水,而侧链碎片离子【包括亚氨离子】可能比较复杂,而且也难以区分上述2种情况。因此,单纯的ms/ms基本上不能有效鉴定C末端COOH与C末端侧链COOH参与脱水。
去年以来,我们在此方面进行了大量探索,发现需要多种样品前处理和多种质谱联合,才能完成上述鉴定,并且,一般来说,是2种情况共存,因此,需要计算它们的比例。
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【wkh, 2019-04-08 08:57:58】
【责任人 wkh】
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