从本人曾经的微信公众号文章找回。

Native与Non-Native条件下的ESI行为问题，十分值得质谱人思考。尤其是，蛋白质ESI检测灵敏度的定义，还真不是个容易回答的问题。以本人肤浅的理解，大致意见如下，敬请指正。

1 电喷雾中，一定只有一部分样品被电离并进入到质谱体系，此为“一级电离效率”。

2 当离子进入质谱，飞行过程中可能存在电荷丢失，如文献报道的蛋白质的Charge Stripping现象，因此，有 “三级电离效率”问题。

3 FA溶液体系（Non-Native like 或 semi-Native）与非酸性溶液体系（如中性Native溶液体系）相比，在ESI+中，前者的电离效率预期应该会高很多，灵敏度应该也会高很多。大家应该很确定，中性溶液的样本不太容易测正离子质谱（比如做蛋白与小分子相互作用，需要类似天然状态的Buffer体系）。

4 蛋白酸性溶液在酸性ESI液滴中与蛋白中性溶液在酸性ESI液滴中（LC-MS），谁的电离效率更高？不容易判断。电荷脱落率谁高，则电离效率就低。因此，个人认为，一次电离效率高者，液滴电离效率也高，此为“二级电离效率”。

5 蛋白质的ESI+的多电荷状态是在哪里形成的，本人思考了很多年，都没有得到最终答案（尤其是MALDI-TOF）。如果喷嘴接地（即，“吸进去”），柱子里的溶液与Sample Cone应该存在电场，此时，柱溶液中的蛋白质应该被部分电离了（类似电泳那样），这是蛋白质真正的“第一次电离”。流动相构成和流速会决定这个电离效率，nanoLC预期此处的电离效率应该略高。柱溶液中蛋白质的电荷到底是不是多电荷？电荷数是多少？怎么分布的？期待有人回答，至少应该计算一下，此为“零级电离效率”。也有反过来接高压的（即“推进去”，本人都被电打过），柱溶液的蛋白质电荷是不是也一样？

6 当溶液从Tip喷出液滴的最初阶段，是不是电荷最丰富的状态？是不是电荷最多的状态？我也没有数据，从离子密度来讲，可能样品相对较稀，电荷数应该不是最高，但蛋白质样品不至于单电荷状态（即使有很低电荷数，一般的分析器也会过滤它们）。当液滴被浓缩的时候（蒸发爆炸原理），净电荷绝对多数加载在蛋白质上，电荷数应该会增加，到底样品锥前，应该是个电荷动态平衡，其过程的某个空间位置将是电荷最高的状态。

7 蛋白质的ESI+与小分子非常不同，除了电荷数明显高之外，还与蛋白质的空间构型有关，因此，我们经常会观测到2组连续的多电荷峰，各自呈现泊松分布状态，与离子整个过程都可能有关，但不确定是溶液、液滴还是气相影响大，期待您的答案。

8 蛋白质的ESI+既然是多电荷状态，那么灵敏度该以多电荷峰来计算还是去卷积来计算？常规上，大家是以后者来计算的，但是算法影响非常大。目前，好的去卷积算法不多哦（我很确定），因此，如果不是从商业角度或其它某些事情考虑，而是自己开发仪器的话，本人建议以多电荷峰来判断灵敏度，并把电荷数与灵敏度进行关联。实践上，大家所说的灵敏度常常是指最高灵敏度，也就是实验条件进行了最优化，因此，不必考虑具体实验参数。当然，本人不在乎灵敏度指标，而在乎常规使用条件下的表观灵敏度，这与厂家给的指标不同。



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【wkh, 2024-05-28 14:14:06】 【责任人 wkh】 [已阅读 286 次]