二硫键的质谱法解析，我写过很多小短文了，有兴趣的朋友在本站查一下即可。总体上，不同的二硫键模式，解析方法非常不同。能直接采用“酶解--串联质谱法”解析的蛋白，真不多。样品前处理策略是极其关键的。有些数据很复杂，商业化软件未必能支持此类计算，所以，如果你能自己写软件，那就很牛了。当然，计算原理必须正确无误。

    送检样品存在2组4个特殊分布的Cys：C4、C5为相邻2个Cys，除了“氰基水解法”和“随机酸水解法”，无其它办法可将它们断开；送检样品C6、C7中间由Gly连接，无任何酶解办法可将它们断开；

    送检样品任何蛋白酶酶解时均不能获得“每个二硫键肽只含2个子肽且每个子肽只含1个Cys”的二硫键肽，从而难以彻底可靠解析二硫键连接模式。

    此外，“氰基水解法”实验过程难度大，能否成功解析还与蛋白序列特征密切相关；“随机酸水解法”存在较高的假阳性。

    因此，本报告采用“三种方法联合解析”的策略来鉴定二硫键连接模式，其中，采用了多步骤中间物分离、收集和再反应的过程，不仅非常辛苦，而且需要优秀的技巧才能获得优异的反应条件。

    此小蛋白链间及链内均存在非预期二硫键。个人认为，不解析报批药物的非预期二硫键者，都不算真正的二硫键分析，都多少涉嫌忽悠，毕竟有些蛋白的二硫键异构较严重。

【附，晶体法得到的二硫键模式，只是在晶体培养条件下的二硫键，与溶液中的蛋白二硫键有一定差异，而且，它基本解析不了非预期二硫键（不一定是主要），更计算不了非预期二硫键的相对比例，甚至连自由巯基都不能准确定位！（如果有非预期的话）】

【wkh, 2023-05-04 16:51:22】 【责任人 wkh】 [已阅读 460 次]