二硫键分析是新药报批必不可少的内容。我们建立了【完全二硫键分析策略】（个别方法为独有）！原则上可以满足全部类型的二硫键定位需求。一般来说，蛋白质二硫键定位分析常常可以采用酶切质谱法。多肽二硫键分析则很难套用酶切质谱法。对于CC紧邻的二硫键分析，我们有3套方案，文献报道只有2套方案。

方法的可靠性很重要。我20年前探索的二硫键定位分析方法之【逐步还原多重烷基化标记串联 质谱法】，屡次用于新药报批结构确证，均获得成功。极近，又指导一个新员工做胰岛素二硫键分析，发现以前优化的实验条件依然是极优条件，说明以前的方法相当可靠。

有不少文献报道过二硫键串联质谱法，但实际成功率很低，因为二硫键肽的碎片系列常常不完整，且复杂度高，尤其是，与仪器有较大关系。所以，永远不能仅仅用串联质谱简单粗暴的解析二硫键

MALDI-TOF/TOF近些年来除了在微生物鉴定和质谱成像领域一直很活跃，其实，在蛋白质药物分析方面有ESI-MS无法替代的某些能力，且我推测至少5年内不可能被替代。

在二硫键分析方面，我们极近探索了MALDI串联质谱法，可以直接分析链间二硫键肽，通过对碎片的解析，发现能获得部分关键二硫键相关碎片，且实验灵活性高，比LC-MS/MS一过式技术方便很多，显示出MALDI质谱强大的优势:操作方便，样品量少，灵敏度高，通量大，碎片特征性强，重复实验容易。当然，跟ESI串联质谱分析二硫键一样，它也有一定局限性，我们也不能简单粗暴的指望它一锤定音，还需要其它方法配合。



更多精彩文章，请关注公众号 【药网堂】

All rights reserved , visit the micromessage 药网堂 for more @ tofms_org@126.com

【wkh, 2018-08-05 09:12:17】 【责任人 wkh】 [已阅读 1114 次]