全柱成像cIEF是样品电泳过程中，对等点聚焦毛细管中的蛋白样品实时拍照（CCD），直到电泳程序结束，会形成一系列电泳中间数据。其中，靠近聚焦末尾的某一次数据为极佳聚焦结果。

通过研究大量蛋白质的全柱成像中间数据，我们率先发现许多蛋白质从电极两端分别向中部迁移，从而提供了样本左右两条迁移轨迹——双轨迹聚焦曲线，这种轨迹可以更精细地判别样本的电荷特征，是本方法极独特的优势。

电泳起始时样本并非均匀分布在溶液中，可能是由于本方法不是固定化的胶条（如IPG） ， 尽管柱内纤维素增加了溶液粘度，但两性电解质仍有一定流动性，受电极液强酸或强碱影响，电极附近的柱内溶液ｐＨ值会形成比较明显的梯度， 因此，靠近电极附近的样本在加电后迅速在电极附近被临时聚焦，而柱中部的样本仍为近溶液状态， 不能形成聚焦带（色谱峰）。随着聚焦的进行，电极附近的ｐＨ值逐步向中部迁移直至左右重合，此时应该停止聚焦，否则， 样本和柱内ｐＨ值将继续迁移，导致过聚焦。由于本系统是实时采集聚焦过程，即使极后一张电泳图过聚焦，仍然可以从采集数据中轻易获得聚焦的图，从而不影响等 电点和纯度分析。

【wkh, 2020-08-10 20:18:44】 【责任人 wkh】 [已阅读 1371 次]