7. 多种策略解析各种蛋白质和多肽药物二硫键，国内领先

许多蛋白质药物含有二硫键，其中绝对多数二硫键影响药物的活性和品质，所以，二硫键是新药报批的必检项目，包括预期二硫键和非预期二硫键及其相对比例。二硫键研究的方案比较多，常见的是质谱方法，但涉及到许多不同的样本处理技术，综合解析是二硫键分析的基本策略。我们建立了基于质谱、色谱和CE的“三合一定量方法”以及完整的解析策略（图9）。该策略几乎可以解决所有蛋白质的二硫键定位问题，还可以阐述二硫键与电荷异构体的关系。

我们已经完成近百个蛋白质或多肽药物的二硫键分析，主要是定性分析和半定量分析，如HSA（17对）、抗体（IgG1）、IgG2（特别复杂）、FSH、IFN、TPO、EPO、IL6、IL12、血凝酶、Insulin以及HSA融合蛋白、FC融合蛋白或多肽，等等。

从目前的结果看，HSA虽然二硫键特别多但非常稳定，主要的异构体来自N端和C端的自由卷曲特征；IgG1抗体的二硫键相对较稳定，异构体含量较少，但IgG2二硫键十分复杂，异构体多；非抗体糖蛋白的二硫键通常较复杂，异构体多，还常存在自由巯基并产生共价多聚体；为了简化过度复杂的二硫键肽段，适当的样本拆分是十分重要的；天然糖蛋白与其重组产品的二硫键常常会不一致，此时批间一致性和表面结构的一致性就需要仔细研究。



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【wkh, 2017-06-05 16:56:01】 【 111.200.206.194】 【责任人 wkh】 [已阅读 1407 次]