【项目进展】【分享】ESI-MS测PEG及其蛋白分子量准确吗

【分享】ESI-MS测PEG及其蛋白分子量准确吗 PEG是重组长效蛋白药物中的一种，曾经还是主要的一种，与长效型融合蛋白比较，各有优缺点。 不同PEG产品的分子量及其分布不同，目前极常见的是20kDa产品，但真的是20kDa吗？只有质谱测定结果可以准确回答 MALDI-TOF质谱测定PEG及其相关蛋白的分子量，出信号很容易，但要测准确分子量则很不容易。我们开发了一套极大程度测准PEG分子量的MALDI-TOF质谱方法。 但是，ESI-MS被认为比MALDI-TOF MS更准确，这对于非PEG或非多位点糖蛋白等复杂结构蛋白来说，无疑是正确的， 但对于多分散型物质（如PEG等），ESI-MS是不是会更准确呢？只有需要数据可以来回答 极近收集了部分测定PEG和PEG蛋白的分子量的文献，选取了个别代表性文章，对结果进行了比较和归纳，参见图1~图5。 首先，看文献的实验过程与思路，发现ESI-MS测定PEG类物质分子量时，确实需要熟练的预处理和检测技巧，否则，基本上就会失败。 不同文献给出的方案不同，但都看得出来，肯定是费了相当大的努力的，作为发表论文，是真的很有参考意义。 如果作为常规分析方法（如PEG药物分析），则还需要考虑结果重复性、方法可移植性、系统可维护性以及时间经济成本等。 图1是极直接的明了的方法，如果真能很方便获得这样的信号，参考价值比较大。不知道作者单位是已经形成了常规检测方法了。 图2的核心在于图C中的同位素分辨效果，我计算的偏差看图3。可以肯定的说，本方法是非常难以重复的，而且未必能获得可靠的同位素分布峰型。 如果看峰间计算结果差异（图3），可以确认，要获得优异的准确度，必须获得优异的多电荷峰形甚至同位素峰形， 否则，采用不同的峰计算的结果差异较大，其极终平均结果差异也很大， 这算不算该文献没有给出全部个峰计算结果及其准确度的原因呢？（发表论文总是精心挑选极好的数据和结果，大家都明白这个！） 从分子量棒状图看，峰型分布也不完整，提示应该是信号未完整被检出或解析。 本方法太有难度，但学术意义较大，值得进一步完善，比如能测双20kDaPEG修饰蛋白吗？。 图4是我们实验室采用MALDI-TOF测量的结果，实验难度肯定是小很多，所以，凡是ESI-MS难以测出分子量的样品，我们都这样解决。 表1是3种方法的结果比较，虽然大家都是20kDa PEG，但由于产品来源不同，很难准确判断谁更准确。 大致上，我们认为，MALDI-TOF方法的准确度，与ESI-MS结果具有良好的可比较性，可以满足分析要求。 总之，ESI-MS理论准确度肯定高于MALDI-TOF，但实测准确度就与待测物质和具体方法有关了。 更多精彩文章，请关注公众号 【药网堂】 All rights reserved , visit the micromessage 药网堂 for more @ tofms_org@126.com 【wkh, 2021-02-24 11:59:03】 【责任人 wkh】 [已阅读 2308 次]

Email：tofms_org@126.com 【有疑问，发邮件】 © 2008- All Rights Reserved, Powered by WKH© 2008