我相信很多做抗体的朋友都会认为,SDS-PAGE图上 180kDa上方的条带是抗体聚合体,而且多数人认为是二倍体,即H4L4 !
其实,情况比你想象的复杂得多。
首先,你怎么确定是二倍体呢?多数人是看分子量吧。可是,电泳分子量误差相当的大,这个推测不可靠。
其次,是共价连接还是非共价连接呢?很多人会说,DTT还原只看到H和L,所以是共价!要我说,这个没必然逻辑---非共价连接的话,DTT照样会还原成H和L,你试试FSH等许多非共价蛋白去看看就知道了。
我们这些年对这类现象进行过许多研究,也是一直在不断理解抗体聚合体的构成。极近,我们基本上得到了较可靠的解释。
抗体聚合体由共价和非共价结合物共同构成,且聚合体H和L的比值,并非1:1(2:2,4:4),而是存在多种比例,如H3L4,H4L4,H3L5等!它们的形成机制有多种,一种是在发酵过程中直接组装而成;另外一种是,抗体药物中游离H或L共价或非共价连接到H2L2母核上。另外,抗体原则上是很少有自由巯基,但我们已在多个抗体药中确定了自由巯基的存在,这也是形成共价聚合体的一个潜在原因。
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【wkh, 2017-09-15 19:14:17】
【责任人 wkh】
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